食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157：H7/NM检验 GB 4789.36-2016标准检测-高清3d肉蒲团メイリン モデルコレクション メ|性饥渴的风流退休老妇メイリン モデルコレクション メ

增菌：以无菌操作取检样25g（或25mL）加入到含有225mL改良EC肉汤（mEC+n）的均质袋中，均质后于36℃±1℃培养18h~24h。

分离：取增菌后的mEC+n肉汤，划线接种于改良山梨醇麦康凯琼脂（CT-SMAC）平板和大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板上，36℃±1℃培养18h~24h，观察菌落形态。

在CT-SMAC平板上，大肠埃希氏菌O157:H7/NM通常为圆形、光滑、较小的无色菌落，中心呈灰褐色。

在大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板上，菌落特征按产品说明书进行判定。

初步生化试验：挑取可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂（TSI）和月桂基盐胰蛋白胨肉汤-MUG（MUG-LST），于36℃±1℃培养18h~24h。

在TSI琼脂中，典型菌株为斜面与底层均呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢（H2S）。

将MUG-LST肉汤管置于长波紫外灯下观察，MUG试验阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生，MUG试验阴性的应无荧光产生，大肠埃希氏菌O157:H7/NM为MUG试验阴性，无荧光。

鉴定：

血清学试验：在营养琼脂平板上挑取分纯的菌落，用O157和H7诊断血清或O157乳胶凝集试剂作玻片凝集试验。对于H7因子血清不凝集者，应穿刺接种半固体琼脂，检查动力，经连续传代3次，动力试验均阴性，确定为无动力菌株。

生化试验：从营养琼脂平板上挑取菌落，进行生化试验，如靛基质、甲基红-伏普试验（MR-VP）、氧化酶、西蒙氏柠檬酸盐、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、纤维二糖发酵、棉子糖发酵等试验。

毒力基因测定（可选项目）：样品中检出大肠埃希氏菌O157:H7或O157:NM时，如需要进一步检测Vero细胞毒素基因的存在，可通过接种Vero细胞或HeLa细胞，观察细胞病变进行判定；也可使用基因探针检测或聚合酶链反应（PCR）方法进行志贺毒素基因（stx1、stx2）、eae、hly等基因的检测。

平板计数法：适用于该菌含量较高的食品。选取适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL。同时取1mL稀释液加入无菌平皿做空白对照。将冷至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于每个平皿中，待琼脂凝固后，再加3mL~4mLVRBA-MUG覆盖平板表层。凝固后翻转平板，36℃±1℃培养18h~24h。选择菌落数在10CFU~100CFU之间的平板，暗室中360nm~366nm波长紫外灯照射下，计数平板上发浅蓝色荧光的菌落。

MPN计数法：适用于该菌含量较低（<100CFU/g）且杂菌含量较高的食品。按一定比例稀释样品，接种至多管发酵管中，根据阳性管数查MPN表，报告每克（或每毫升）样品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM的Zui可能数（MPN）。