食品 PCR 牛、羊、猪源性成分检测
用于定性筛查食品中是否含有牛、羊、猪 DNA,主要用于肉类掺假鉴别、标签符合性核查、清真 /素食产品核验、原料质控。
适用样品:生鲜肉、冻肉、肉肠、肉糜、肉罐头、肉松、复合调味料、明胶、乳及肉制品等;高温灭菌、深度加工样品依然可测(DNA片段化,但种属特异性短片段仍可扩增)国家市场监...
GB/T 38164-2019《常见畜禽动物源性成分检测方法 实时荧光 PCR法》(现行国标,TaqMan 探针法,检出限 1% 质量分数,可同时测牛、绵羊 /山羊、猪等)全国标准信...
BJS202605《食品中多种动物源性成分检测》(市场监管总局食品补充检验方法,多组分同步荧光 PCR,靶标线粒体cytb 基因,检出限 1%)国家市场监...
GB 25165-2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法 实时荧光 PCR 法》(专门针对明胶基质)科技导报社
传统普通 PCR(凝胶电泳)也可做定性,但灵敏度低、易污染,第三方检测机构主流采用实时荧光PCR(qPCR)。
提取样品总 DNA,加入牛、羊、猪种属特异性引物 +荧光探针,只扩增对应物种的线粒体基因(cytb 等);扩增过程产生荧光信号,仪器记录 Ct 值。
阳性:出现扩增曲线,Ct 低于阈值 → 检出该动物源性成分
阴性:无扩增曲线 → 未检出
可疑区间:Ct 在临界区间,需要复测确认国家市场监...
样品前处理:均质粉碎,去除油脂、盐分、色素等 PCR抑制剂(高温加工样品抑制剂风险更高)
DNA 提取:磁珠法 / 柱提法提取基因组 DNA,检测 DNA 浓度与纯度
PCR体系配制:分别配置牛、羊、猪反应体系,同时设置阳性对照、阴性对照、空白对照(质控防假阳性/ 假阴性)
实时荧光 PCR 扩增
结果判读与报告:定性结果:检出 /未检出;常规方法只定性,不能直接给出掺假百分比;如需定量掺假比例,需要 ddPCR 数字PCR。
检出限 LOD:1%(质量分数),即样品中含有≥1% 的牛 / 羊 /猪成分可检出;部分体系可做到 0.1%(海关旧标准)中华人民共...
特异性:牛、羊、猪之间无交叉扩增;但牛包含黄牛、水牛、牦牛;羊包含绵羊、山羊。
局限性:只能判断有没有该物种 DNA,不能区分生肉 /熟肉,不能区分肌肉、骨、皮、明胶等组织来源;强降解样品(长时间高温高压)会出现假阴性。
CMA 报告:出具定性结果:牛源性成分:检出 / 未检出;羊源性成分:检出 /未检出;猪源性成分:检出 / 未检出
注意:“未检出”≠不含,代表低于本方法检出限(<1%)
基质干扰:高油脂、高盐、香料、单宁会抑制 PCR,造成假阴性;样品交叉污染容易造成假阳性。
样品接收 → 前处理 + 提取 + PCR:1~3 个工作日;批量样品可压缩。
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